Encimski imuno test z razčlenitvijo indikatorjev

Današnje diagnostične tehnike v laboratoriju ponujajo priložnost, da s pomočjo posebnih testov prepoznajo določeno bolezen. Enim od teh je treba pripisati encimski imunski test, s pomočjo katerega lahko potrdite predhodno diagnozo.

Kaj je encimski imuno test

Encimski imunosorbentni test je ena najbolj učinkovitih in sodobnih metod za odkrivanje bolezni infekcijskega načrta, motenj, povezanih z imunskimi in hormonskimi motnjami, pa tudi onkoloških procesov. Med analizo lahko v krvi odkrijemo protitelesa, ki nastanejo, ko pride do okužbe v telesu. Glede na to nianso lahko bolezen zaznate že v zelo zgodnji fazi njenega razvoja..

Kaj je osnova tehnike

Rezultati analize ELISA temeljijo na pridobivanju kemičnih reakcij na encime, ki služijo kot posebne identifikacijske oznake za prepoznavanje protiteles. Zato med imunokemičnimi reakcijami protitelesa začnejo medsebojno vplivati ​​na določene antigene. Vse to daje razlog za trditev, da so lažni rezultati pri odvzemu krvi za ELISA minimalni.

Študija vam omogoča, da določite število imunskih celic, njihove lastnosti, pa tudi prisotnost potrebnih protiteles

Pozitiven rezultat se upošteva, ko se odkrije obarvanje raztopine. Barva pomeni, da antigeni delujejo s protitelesom. V primeru, da se nič takega ne zgodi, je rezultat negativen.

Pozitivni vidiki IFA

Glede na to, da metoda temelji na metodi pridobivanja imunskega odziva iz človeškega telesa, je ta metoda posredna diagnostična metoda.

Prednosti encimskega imunološkega testa:

• Prisotnost različnih modifikacij analize.
• Visoka natančnost in obdelovalnost.
• Verjetnost napačne analize se zmanjša na skoraj nič.
• Uporablja se za diagnosticiranje bolezni ne samo pri odraslih, temveč tudi pri otrocih..
• Univerzalnost. Analiza ograje vam omogoča, da potrdite prisotnost bolezni ali obratno ovržete strahove.

Katere bolezni je mogoče odkriti z uporabo ELISA

Kot že omenjeno, s pomočjo analize lahko ugotovite številne kršitve, značilne za prisotnost ene ali druge težave. Zato mnogi specialisti predpisujejo ELISA večini bolnikov..

Do danes nam krvni test po zgoraj opisani metodi omogoča odkrivanje prisotnosti številnih okužb, prikazanih v tabeli:

Ob upoštevanju dejstva, da je odkrivanje bolezni mogoče že v zgodnji fazi, je mogoče bolezen zdraviti takoj, zato je mogoče nanjo dovolj hitro pozabiti.

Kako se pripraviti na analizo

Enzimski imunosorbentni test prihaja iz vene in ne iz prsta, kot nekateri mislijo. Da bi bili podatki pravilni, je treba upoštevati več preprostih pravil.

Vzorec krvi za pregled se odvzame iz ulnarne vene

• Nekaj ​​dni pred preskusom ne dvigujte uteži in ne opravljajte težkih fizičnih del.
• Čez dan ne pijete alkohola ali kadite (sploh ne morete biti v zadimljeni sobi).
• Ostani miren.
• Teste lahko opravite ne prej kot 10 dni po uporabi katerih koli zdravil.

Nekatere tablete lahko vplivajo na rezultat analize, zato če vnosa ni mogoče preklicati, o tem obvestite zdravnika.

Nekateri strokovnjaki priporočajo tudi lahkotno prehrano nekaj dni pred analizo. Govorimo o abstinenci od prekajene, ocvrte in slane hrane. Če kri darovano za odkrivanje hepatitisa, citrusov ne bi smeli uživati ​​v obliki sadja ali soka..

Strokovnjaki priporočajo lahno prehrano nekaj dni pred analizo.

V primeru, ko je treba ugotoviti hormonsko neravnovesje, lahko mesečni cikel žensk vpliva na splošno analizo. V tem primeru zdravnik sam določi datum, kdaj bo test najbolj optimalen..

Spodaj je tabela, ki prikazuje spremembe normalne ravni luteinizirajočega spolnega hormona glede na dan menstrualnega cikla.

Podatki o spremembah normalne ravni luteinizirajočega spolnega hormona v tabeli

Analiza omogoča prepoznavanje različnih vrst protiteles v telesu, ki se pokažejo v vsaki fazi razvoja bolezni. Ko se je bolezen šele začutila, se aktivno proizvajajo protitelesa razreda IgM. Če bi jih našli, potem kakšno bolezen.

Po proizvodnji IgM se začne proizvodnja IgG, kar kaže, da je oseba bodisi prenašalka okužbe ali pa je pred kratkim zbolela za nečim nalezljivim. Običajno lahko IgG odkrijemo po 3-4 tednih, če računamo od začetka razvoja IgM, vendar so nekatera protitelesa lahko v telesu že leta.

Obstaja tudi razred protiteles, kot je IgA, kar kaže na prisotnost kronične okužbe v telesu. Če ga odkrijemo, se začne takojšnje zdravljenje, nato pa se ponovno opravi krvni test ELISA, ki poskrbi, da se je zdravljenje izplačalo.

Položaj je nekoliko drugačen pri otrocih, mlajših od enega leta in pol, v telesu katerih je v zgodnji življenjski fazi, da se zagotovi zanesljiva zaščita pred virusi, prisotno veliko protiteles IgG. Zato je pri preverjanju dojenčkov glavni poudarek na razredu IgM.

Spodnja tabela prikazuje kombinacije prisotnosti ali odsotnosti okužbe..

Tabela dešifriranja norm krvnih testov IFA za prisotnost (odsotnost) okužb

S sklepanjem lahko rečemo, da ko v telesu odkrijemo določena protitelesa, je znak „+“ poleg vrednosti v tabeli.

Včasih lahko zdravnik po prejemu analize odredi še eno, da ugotovi količinsko vsebnost snovi v telesu.

Dešifriranje encimsko vezanega imunosorbentnega testa mora opraviti samo specialist, ki bo primerjal rezultate z razpoložljivimi simptomi in predpisal kompetentno zdravljenje.

ČE Laboratorij

Rusija se pripravlja na popolno testiranje, novi testni sistemi vam omogočajo hitro izvajanje obsežnega pregleda virusa. Eden od razvijalcev novega izdelka je začel množično proizvodnjo, druga dva začneta proizvodnjo. Oleg Gusev, vodilni raziskovalec Znanstvenega kliničnega centra za natančno in regenerativno medicino Kazanske zvezne univerze in Inštituta za fizikalne in kemijske raziskave RIKEN (Japonska), je podjetju RBC Trends pomagal razumeti, kako deluje testiranje koronavirusa v Rusiji in na svetu..

Kaj ponuja WHO

Vodja Svetovne zdravstvene organizacije Tedros Gebreisus je sredi marca države pozval, naj opravijo čim več testov na virus, ki povzroča SARS-CoV-2, tudi na ljudi brez simptomov. V skladu s smernicami WHO je treba preskuse na koronavirus COVID-19 opraviti z verižno reakcijo z reverzno transkripcijo polimerazo (PCR). Kot je navedeno v priporočilih, je danes najbolj natančna in zanesljiva metoda za diagnosticiranje virusne okužbe. Omogoča vam določitev celo zelo majhne količine virusa RNA v človeškem biološkem materialu. To pomaga prepoznati bolezen v inkubacijskem obdobju..

Izumljena leta 1983, metoda danes velja za temeljno v molekularni diagnostiki. Ameriški znanstvenik, ki je zasnoval način, kako znatno povečati majhne koncentracije fragmentov DNK v biološkem vzorcu, je prejel Nobelovo nagrado za to. Zaznavanje DNK / RNK s PCR vam omogoča diagnosticiranje bolezni, kot so HIV, virusni hepatitis, spolno prenosljive okužbe, tuberkuloza, borelioza, encefalitis in številne druge. Metoda se uporablja v arheologiji, forenziki, genetiki.

Kako deluje test PCR?

Za analizo se enodvesena RNA ekstrahira iz fizioloških tekočin, na njeni osnovi se modelira dvo verižna DNK in se večkrat podvoji s posebnim encimom (polimerazo). Povečanje števila kopij DNK se imenuje amplifikacija. Posledično se koncentracija nekaterih fragmentov DNK / RNK v biološkem vzorcu, sprva minimalna, znatno poveča. Med študijo se kopira samo tisti del DNK, ki je potreben za test. Seveda se podvajanje zgodi le, če je v preiskovanem biomaterialu želeno območje virusne DNK ali RNA. Pri koronavirusu se odvzame bris za orofarinks ali nazofarinks, saj se virus pojavi v krvi ali blatu na bolj napredni stopnji bolezni.

V Rusiji so po podatkih Rospotrebnadzorja 4. aprila opravili več kot 697 tisoč PCR testov. Izvedla sta jih dva testna sistema, ki sta jih razvila Novosibirsk center za virusologijo in biotehnologijo "Vector", podrejen Rospotrebnadzorju - "Vector-PCRrv-2019-nCoV-RG" in "Vector-OneStepPCR-CoV-RG" za nadzor rezultatov začetnega preskusa. Te teste je Vector razvil v začetku januarja na podlagi razpoložljivih podatkov o virusu..

Do konca marca je Vector ostal glavni proizvajalec testov za COVID-19. Center na teden proizvede 500 tisoč testnih sistemov in jih oskrbi z državnimi laboratoriji. Po navedbah proizvajalca je dobavljen v 15 največjih diagnostičnih laboratorijev v državi: vključno z zasebnimi laboratoriji Helix in Hemotest.

20. marca je Roszdravnadzor dal dovoljenje za uporabo rusko-japonskega diagnostičnega sistema za odkrivanje koronavirusa, ki ga je na ruski trg prinesel Evotech-Mirai Genomix (EMG). Investitor projekta je bil Ruski sklad za neposredne naložbe.

Rusko-japonska tehnologija ekspresne diagnostike COVID-19 je skupni razvoj japonske družbe Mirai Genomics in njenega ruskega partnerja LLC Genetic Technologies, ki je hkrati neposredni preskus in prenosni diagnostični sistem. Rusko-japonski razvoj omogoča zelo natančno ekspresno diagnostiko virusa v največ 30 minutah. Ker je tehnologija prilagojena mobilnim laboratorijem, omogoča testiranje ljudi kjer koli in lahko hkrati obdelajo vzorce 20 ljudi.

Testni sistem EMG je plod skupnega razvoja ruskih in japonskih razvijalcev, ki se izvaja od leta 2016, pravi Oleg Gusev. Trenutno so ti testi vključeni v sistem obveznega zdravstvenega zavarovanja na Japonskem..

Dela na mobilni diagnostični platformi se izvajajo od leta 2017 kot del enega od 30 projektov sodelovanja med Rusijo in Japonsko. Klinična preskušanja so bila izvedena na Japonskem in v Rusiji s podporo razvijalcev "Vector". Poleg tega so bili testi v Združenih arabskih emiratih in Avstriji. Občutljivost sistema je od 5-10 kopij virusa na reakcijo, hitrost je 18-20 minut.

V bližnji prihodnosti naj bi izdelali do 2,5 milijona testov in tisoč prenosnih laboratorijev na teden. Tako kot številni reagenti tudi sami testi potekajo v Rusiji. Načrtuje se, da bo cena za EMG teste v povprečju petkrat nižja kot za standardne PCR teste v Evropi.

Rusko-japonski testi temeljijo na izotermalni metodi molekularne diagnostike SmartAmp, ki je osemkrat hitrejša od metode PCR, prenosni laboratorij pa omogoča testiranje do 20 bolnikov na uro, pravi Gusev.

Ključna razlika med testom EMG je v tem, da so mnogi testi, ki se izvajajo, preskusi ELISA (encimsko-imunski absorbentni test) in ne PCR. Ti sistemi določajo protitelesa, ki jih telo začne proizvajati ne prej kot teden dni po okužbi. Rusko-japonski razvoj vam omogoča, da rezultat dobite v 30 minutah, z natančnostjo skoraj 100%. Poleg tega vam EMG test omogoča določitev prisotnosti virusa v zgodnji fazi, medtem ko so drugi diagnostični sistemi za coronovirus manj občutljivi in ​​ne morejo odkriti virusa v zgodnji fazi okužbe..

Načelo tehnologije rusko-japonskega testa se v resnici ne razlikuje od klasičnega PCR - to je povečanje števila ciljnih fragmentov DNK in njihovo odkrivanje. Vendar se pri izotermalnem ojačevanju, za razliko od klasičnih PCR, kjer sta potrebna ogrevalna in hladilna cikla, dogaja vse pri isti temperaturi. To vam omogoča, da večkrat povečate hitrost reakcije. Metoda SmartAmp je bila izumljena pred več kot 15 leti (podobno kot LAMP, še ena priljubljena tehnologija izotermičnega ojačevanja, ki pred SmartAmpom). Ta tehnologija je bila prvič za nalezljive bolezni uporabljena leta 2009 za hitro odkrivanje pandemične gripe (H1N1) na Japonskem..

Ponovni preskusi so potrebni pri kateri koli metodi. Negativni test COVID-19 ne zagotavlja, da se človek naslednji dan ne bo okužil z virusom. Zato se na primer v japonskih laboratorijih osebje testira na vsakih nekaj dni. Za potrditev, da si je oseba opomogla, je potreben tudi drugi test..

Moskovske oblasti so kupile 100 tisoč testov in 56 mobilnih diagnostičnih sistemov v vrednosti 192 milijonov rubljev. Začetek testiranja je predviden takoj po prejemu kompletov. Prednost bodo imele bolnišnice, kjer so ljudje, ki resnično potrebujejo pomoč. Trenutno so v laboratorijih mreže Archimedes, KDL in klinike za mater in otroka že začeli testiranja EMG..

Ta testni sistem bo uporabljen za diagnozo COVID-19 ne samo v Rusiji in na Japonskem. Avstrija je kupila 40 tisoč testov, naročila so prejeli iz drugih držav Evrope, Bližnjega vzhoda in Latinske Amerike. Ameriška agencija za hrano in zdravila (FDA) je zaprosila za pošiljke v to državo..

Trenutno so v Rusiji registrirani še trije testi na koronavirus.

Eden prvih, po "Vektorju", je njegov test "Amplitest SARS-Cov-2" razvil Center za strateško načrtovanje in obvladovanje tveganj Ministrstva za zdravje Rusije (CSP). Ustvarjanje testa se je začelo 31. januarja, 6. marca je izdalo registracijsko potrdilo Roszdravnadzorja, 27. marca pa je center sporočil, da je začel serijsko proizvodnjo testnih sistemov v Moskvi. Ocenjena proizvodna zmogljivost bo 10 tisoč testov na dan, nato pa lahko zraste do 50 tisoč.

Podjetje CSP je podpisalo pogodbo za dobavo 60 testnih sistemov centralni klinični bolnišnici Zvezne državne proračunske institucije ruske predsedniške uprave. Poročalo se je, da namerava laboratorij InVitro uporabiti ta test: podjetje namerava začeti testirati v svojih laboratorijih aprila.

Drugi test so razvili specialisti Zvezne agencije za biomedicino (FMBA). Njihov testni sistem "Polivir za PCR diagnostiko SARS-CoV-2", ki omogoča skrajšanje časa analize na 90 minut, je prejel državno registracijo 27. marca. FMBA je začela izdajo svojih testnih sistemov 30. marca. V prvem tednu bo agencija objavila 100 tisoč testov, v prihodnosti - 200 tisoč testov tedensko. Visoka občutljivost testnega sistema omogoča zaznavanje celo nizkih koncentracij nukleinskih kislin koronavirusa (103 molekul)..

Približno 10 podjetij se testira na različnih stopnjah razvoja in je pripravljeno na registracijo - na primer novosibirsko podjetje Vector-Best, Sistema-Biotech (hčerinsko podjetje AFK-Systems), Testgen in DNA Technologies ".

Po nekaterih poročilih v Moskvi opravijo približno 700 testov na koronavirus na dan. Moskovske oblasti načrtujejo povečanje te številke na 10 tisoč testov na dan, nato pa jo pripeljejo na 25-28 tisoč testov dnevno.

Novo dogajanje v tujini

Bosch začenja svoj preizkus na koronavirus, ki bo najprej na voljo v Nemčiji in bo kmalu na voljo tudi v drugih državah. Zasnovan je na aparatu za diagnostiko Vivalytic, ki bo po mnenju proizvajalcev prvi avtomatizirani test za COVID-19. Test ne prepozna samo koronavirusa, ampak še šest bolezni dihal, na primer virusa gripe A in B. Med laboratorijskimi testi na aparatu je bila njegova natančnost 95%.

Glede na publikacijo ZME Science lahko analizo opravite neposredno v bolnišnici ali medicinskem centru - vzorcev vam ni treba pošiljati v laboratorij in čakati, da pride odgovor. Zdravniki bodo lahko hitro prepoznali in izolirali okužene, pacientom pa ne bo treba ostati v suspenzu več dni. Test je enostavno vzdrževati in ne zahteva posebnega usposabljanja. Medicinsko osebje mora samo vzeti bris iz pacientovega nosu ali grla, ga nanesti na vložek z reagentom in vstaviti vložek v analizator. Vsaka enota lahko opravi do deset analiz v 24 urah.

V Veliki Britaniji so razvili še bolj operativni test za COVID-19. Omogoča vam, da prepoznate COVID-19 v samo 30 minutah. Za njegovo izvedbo sta dovolj prenosna oprema v vrednosti približno 120 dolarjev in komplet trakov za brise za nos in grlo po 5 dolarjev. Naenkrat lahko test opravi do šest ljudi..

FDA je nujno odobril ultra hiter koronavirusni test, ki ga je razvil kalifornijski Cepheid. Z njim je mogoče postaviti diagnozo v samo 45 minutah. Kot poroča Business Insider, za obdelavo rezultatov testov ni potrebno posebno usposabljanje. Vse, kar potrebujete, je dostop do sistema Cepheid GeneXpert - v ZDA jih je 5 tisoč, na svetu pa 23 tisoč.

Začetek skupnega testiranja ljudi na COVID-19 po vsem svetu je dobra novica tako za ljudi kot za nacionalne zdravstvene organe. Do zdaj na svetu ni jasne predstave o tem, koliko ljudi je okuženih s koronavirusom in prepoznati tiste, ki ga že imajo: hospitalizacija ali pošiljanje v domačo karanteno bo omogočila hitro oceno obsega grožnje in pravočasno sprejela ustrezne ukrepe.

Kaj je krvni test za ELISA

Razvoj sodobne medicine v svetu diagnostike ne preneha presenetiti s svojimi dosežki in zdaj zdravniku ni treba dajati domnev o verjetni diagnozi, pri čemer se zanaša le na posredne znake. Ustvarjanje in uvedba v svet laboratorijskih raziskav imunosorbentnega testa (ELISA) omogoča hitro in natančno določitev ne le prisotnosti patogena, temveč tudi številnih drugih značilnosti bolezni.

Zgodovina nastanka in razvoja IFA

Ta metoda testiranja krvi se je začela uporabljati v praktični medicini sredi prejšnjega stoletja - nekje v 60. letih. Njegov prvotni cilj so bile znanstvene raziskave na področju histologije, ki so bile omejene na iskanje in preučevanje celične antigene strukture bioloških vrst. Krvni test ELISA temelji na interakciji povezanih antigenov (AG) in specifičnih protiteles (AT), pri čemer nastaja kompleks "antigen-protitelo", ki ga določa encim.

Tak pojav je znanstvenike spodbudil, da so se odločili, da lahko metodo uporabimo za prepoznavanje beljakovinskih spojin različnih razredov, ki se tvorijo v krvnem serumu, ko patogen vstopi v telo. Te spojine se zaradi njihove neposredne vpletenosti v delovanje imunskega sistema imenujejo imunoglobulini (IG, Ig), odkritje pa je bil največji preboj v laboratorijski diagnostiki..

Hkrati so začeli aktivno uporabljati to zelo občutljivo metodo šele v 80. letih, na voljo pa je bila le v visoko specializiranih zdravstvenih ustanovah. Prvi, ki je dobil priložnost za uporabo analizatorjev encimskih imunoloških analiz, so bili transfuzijski centri in centri, venereološke in infekcijske zdravstvene ustanove. To je bilo posledica hitrega širjenja "kuge XX stoletja" - AIDS-a, zato je bilo potrebno nujno sprejeti diagnostične in terapevtske ukrepe..

Značilnosti metode

Obseg krvnega testa za ELISA je precej širok - trenutno si ni mogoče predstavljati, kako zapleteno bi bilo iskanje vzrokov za številne bolezni. Takšna študija se zdaj uporablja v skoraj vseh medicinskih sektorjih, tudi v onkologiji. Čeprav je informirancem težko razumeti, je bilo v nekaterih primerih, ko so ga opravili, rešiti življenje bolnikov z odkrivanjem tumorja v zgodnjih fazah.

V sodobnih diagnostičnih centrih laboratorijski pregledi ne predstavljajo samo tumorskih markerjev - za to diagnozo so opremljeni z impresivnim arzenalom panelov. Z njihovo pomočjo lahko prepoznate številna patološka stanja, kot so hormonske nepravilnosti in nalezljivi procesi različnega izvora..

Poleg tega bo vodenje in dešifriranje krvnega testa ELISA omogočilo sledenje učinku zdravil na telo bolne osebe in celo živali. Slednji se pogosto uporablja v veterinarskih ambulantah, saj pomaga ohranjati zdravje naših hišnih ljubljenčkov ali hranjencev, zagotavlja stabilno oskrbo z mesom, mlečnimi izdelki in nenadomestljivimi jajci v prehrani.

Tako bo zdravnik, ko je opisal raziskovalno gradivo, zbral le nekaj mililitrov venske krvi in ​​njeno diagnozo z ELISA, ugotovil:

• hormonsko stanje, vključno z biološko aktivnimi snovmi spolovil in ščitnice, pa tudi nadledvičnih žlez;
• prisotnost bakterijskih in virusnih okužb (hepatitis B in C, sifilis, herpes, klamidija, tuberkuloza, miko- in ureaplazmoza, HIV, TORCH) in druge takšne bolezni;
• znaki vitalne aktivnosti povzročiteljev patološkega procesa, ki so dosegli vrhunec in prešli v stopnjo tvorbe protiteles (imunski odziv).

Takšne komplekse imunske celice veliko lažje prepoznajo in izločijo. Preostali učinki v obliki protiteles v mnogih primerih ostanejo v krvi vse življenje, kar praktično zmanjša tveganje za ponovno okužbo na nič.

Vrste imunoglobulinov

Obstaja več vrst protiteles, od katerih je vsako v določeni fazi vključeno v proces imunskega odziva. Na primer, imunoglobulini razreda M (IgM) so prvi, ki se odzovejo na vdor AH v telo. Njihove najvišje stopnje so opažene v zgodnjih dneh bolezni.

Nato imunski sistem sproži IG razreda G (IgG) v plazmo, ki je odgovoren za popolno uničenje antigenov in okrevanje pacienta. Kasneje so še naprej v krvi, s čimer imunski sistem pripravi na večkratno izpostavljenost identičnemu patogenu. Po tem načelu cepljenje deluje. Z vnosom oslabljenih antigenov patoloških mikroorganizmov se pojavi veliko imunoglobulinov in še naprej krožijo v plazmi.

In kasneje, če pride do patogenega stika, se hitro spopadejo z okužbo in tako rešijo telo pred grožnjo zdravju. IgA v velikih količinah je koncentriran v sluznicah in preprečuje vstop patogenih virusov in bakterij v telo. IgE so odgovorni za ubijanje parazitskih okužb, v imunskem odzivu pa je vključenih veliko drugih imunoglobulinov..

Glavni cilji laboratorijske diagnoze so razredi Ig, G in A. Po stopnji njihove koncentracije lahko določite stopnjo bolezni in ugotovite, kakšne nalezljive bolezni je človek imel v življenju. Na primer, lahko preverite, ali je bila v preteklosti čičerka ali rdečkica. Zdravniku, da ugotovi, ali je v bolnikovem telesu prisotna določena vrsta AT ali AH ali koncentracija hormona, ni treba predpisovati več laboratorijskih pregledov - dovolj je, da napiše napotnico za ELISA.

Bistvo tehnike

Z encimskim testom imunosorbentov za parazite in druge mikroorganizme, ki škodujejo zdravju telesa, ni mogoče samo ugotoviti prisotnosti patogenov, ampak tudi pove, kako je v bolnikovi krvni plazmi njihova številčnost. Tako takšna študija omogoča kvalitativno in kvantitativno analizo patogenih mikroorganizmov, ki jih najdemo v serumskem materialu..

Raven koncentracije patogena pomembno vpliva na razvoj okužbe in hitrost ozdravitve, zato kvalitativna ocena velja za nič manj pomembno kot kvantitativna. Daleč igra zadnjo vlogo pri zdravljenju otrok in odraslih. Toda kako IFA uspe prepoznati tako širok spekter mikroorganizmov, ki parazitirajo v telesu ljudi in živali, kar povzroča škodo in zmanjšuje kakovost življenja?

Metodologija raziskovanja temelji na več možnostih (neposrednih in posrednih - konkurenčnih in nekonkurenčnih) za dokončanje nalog, od katerih je vsaka določena za posebne namene. Ta pristop omogoča ciljno iskanje in v najkrajšem možnem času ugotoviti vzrok določene patologije. Za zaznavanje Ig različnih kategorij se uporablja plošča s 96 vdolbinicami (polistirenska plošča), v njenih vdolbinicah pa so sorbirani rekombinantni proteini. Igrajo vlogo antigenov in v začetni fazi so v trdni fazi.

Po vstopu v luknjo s krvno plazmo antigeni ali protitelesa identificirajo predmet v povezavi z njegovo usmerjenostjo in tvorijo kompleks (AG - AT). To tvorbo fiksira encimska spojina (konjugat), ki se pozneje manifestira kot spremenjeno obarvanje luknje. ELISA se izvaja na posebnih preskusnih sistemih, izdelanih v specializiranih laboratorijih in opremljenih s celotno paleto reagentov.

Ta analiza se lahko opravi na loputah - podložkah in odčitavanju spektrofometrov, vendar zahtevajo ročno delo. Seveda je laboratorijski asistent nekajkrat bolj priročen in hitrejši za izvajanje vseh manipulacij na popolnoma avtomatiziranih napravah. Kadar jih uporabljamo, je laboratorijsko osebje oproščeno velike količine monotonih aktivnosti - pranje, zakopavanje in ostalo rutino, vendar pa si vse zdravstvene ustanove ne morejo privoščiti tako drage opreme

Interpretacija raziskovalnih materialov je izključno v pristojnosti specialista za laboratorijsko diagnostiko - le on mu lahko pokaže rezultate o posebnostih in posebnostih poteka bolezni. V tem primeru mora zdravnik zagotovo razmisliti o možnosti prejemanja lažnih negativnih ali lažno pozitivnih odgovorov.

Dešifriranje materiala

Rezultat kakovostne imunološke diagnoze bi moral biti nedvoumen zaključek - v tem vzorcu krvi najdemo želeni mikroorganizem ali ne. Kvantitativna analiza bo pokazala stopnjo koncentracije in jo lahko izrazimo na dva načina - vrednost v številkah ali število znakov "+".

Analizirani kazalniki

V procesu raziskav temeljita študija glavnih imunoglobulinov, ki sodelujejo v imunskem odzivu, kot so:

• IgM - odkrivanje tega razreda pomeni razvoj akutne oblike nalezljive bolezni. Negativni rezultati iskanja IgM so lahko tako dokaz odsotnosti želenega patogena kot prehod bolezni v kronični potek.
• IgA - opredelitev tega razreda v odsotnosti IgM v večini primerov signal kronične ali latentne oblike razvoja nalezljive bolezni.
• IgM in IgA (hkratna prisotnost) - pozitivni rezultati za obe vrsti kažejo na vrhunec akutne oblike patologije.
• IgG - njegova prisotnost kaže na preoblikovanje bolezni v kronično obliko ali okrevanje in nastanek imunosti na opredeljeno sredstvo.

Pojav in kopičenje določenega razreda IG se pojavlja v različnih časovnih fazah. Tako se na primer najprej pojavi IgM, približno 5 dni po vstopu patogena. IG so v krvi približno 5-6 tednov, nato pa postopoma izginejo. Trenutno so na voljo za določitev z ELISA. Približno 3-4 tedne po nastanku bolezni se pojavi IgG, ki kasneje lahko ostane več mesecev. Toda v analizi jih ni vedno mogoče zaznati.

IgA nastane v krvi v obdobju 2–4 tednov, 20% jih je v serumu, 80% pa v skrivnosti sluznice. Ti imunoglobulini praviloma izginejo v 2–9 tednih, kar kaže na uničenje patogena in bolnikovo okrevanje. Če ELISA še vedno pokaže prisotnost IgA, potem to signalizira prehod procesa v kronično obliko.

Možnosti rezultatov analize

Glede na pridobljene podatke se lahko ELISA odgovori na obrazcu v obliki tabele s popolnim seznamom vseh protiteles in hipertenzije ter navedbo pozitivne ali negativne reakcije. V določenih situacijah se prikaže kvantitativna vrednost - močno pozitiven, pozitiven, šibko pozitiven ali negativen rezultat. Druga možnost navaja količino protiteles v preučenem vzorcu krvi..

Poleg zgornjih vrednosti v procesu ELISA proučujemo še en kvantitativni parameter - indeks avidnosti AT, izračunan v odstotkih. Pokaže, kako dolgo traja bolezen - torej višji je indikator, več časa se razvije patologija..

Nadomestna metoda ELISA

Encimski imuno test je dokaj znana in pogosta diagnoza. Morda nekateri nikoli niso slišali zanj, vendar obstaja ena različica te študije, ki je širšemu krogu ljudi še manj znana, v kateri je bil odvzet vzorec krvi. Ta tehnika se imenuje analiza blata na okultno kri in se v mnogih primerih izogne ​​dodatnim izčrpavajočim postopkom, ki jih spremljajo tudi neprijetni občutki..

ELISA za okultno kri (molekule hemoglobina) omogoča odkrivanje krvavitev iz prebavnega sistema, tudi rahlega, katerega znakov ni mogoče najti v pacientovem blatu s prostim očesom. Enzimski imunosuorbcijski test okultne krvi v človeškem zaletu v kratkem času lahko pokaže peptični ulkus, polipozo, divertikulozo, tumorje, ki v zgodnjih fazah ne spremljajo določenih simptomov.

Do danes je bilo ustvarjenih na tisoče sort testnih sistemov za encimski imuno test, ki omogočajo najti protitelesa in hipertenzijo na ogromnem seznamu patologij. Zato se ta analiza uporablja v skoraj vseh panogah medicine, za katero koli starostno kategorijo. In absolutna neškodljivost omogoča, da se zatečete k njej med nosečnostjo in za diagnozo oslabljenih pacientov.

Kaj je test krvi ELISA in zakaj je pomemben za diagnozo

Krvni test ELISA, kaj je to? Verjetno se vsi spomnijo, da telo kot odgovor na prodiranje virusov za boj proti njima začne proizvajati komplekse protiteles. Te imunološke spojine lahko prepoznajo in uničijo "svoj" patogen. To je osnova študije, ki vam omogoča, da določite prisotnost in količino imunoencimov, značilnih za določeno bolezen.

Nekaj ​​splošnih analiz

ELISA, ali z encimski imunorbentni test, omogoča določitev specifičnih protiteles (imunoglobulinov) na določeno vrsto patogena. Metoda ELISA temelji na naslednjem:

• imunski sistem kot odgovor na vnos mikroorganizma začne proizvajati protitelesa;
• imunokompleksi so specifični in uničujejo samo tuje celice;
• kadar se v pacientov krvni serum doda izvleček patogena, če obstajajo protitelesa, nastane standardna spojina: protitelo-antigen in encimi se aktivno sprostijo.

Pozitivni ali negativni test v laboratoriju se presodi glede na to, ali se je reakcija zgodila v plazmi po dodajanju patogena vanjo in kako intenziven je bil postopek..

Norma za zdravo osebo so posamezni imunokompleksi ali njihova odsotnost.

ELISA ne kaže na določeno bolezen, temveč samo nakazuje na vrsto patogena, ki je povzročil pojav imunokompleksov, in določi stopnjo vnetnega procesa. To vam omogoča prilagajanje nadaljnjih diagnostičnih metod..

O imunoglobulinih

Kaj je imunoglobulin, mnogi razumejo: imunski kompleks, ki nastane kot odgovor na prodiranje tujih celic. A kaj so oni?

Metoda ELISA vam omogoča izbiro 5 vrst imunoglobulinov:

Glavni za diagnozo so A, M in G (nekateri diagnostični viri navajajo le te tri imunske komplekse), zato je vredno upoštevati njihove značilnosti:

• A - odgovoren je za zaščito sluznice. Pri akutnih patologijah se v krvi pojavi 14 dni po okužbi, včasih pa tudi kasneje, in izgine po 8 tednih od pojava simptomov bolezni. Če imunokompleks IgA traja dlje, potem lahko predpostavimo prehod bolezni v kronično obliko. Antivirus A kaže na poškodbe sluznice mehurja, črevesja ali dihal.
• M - služi kot pokazatelj akutne faze bolezni. V plazmi ga opazimo po 5 dneh od trenutka okužbe (tudi če ni izrazitih znakov bolezni) in izgine po 6 tednih, če se akutni proces razreši.
• G - preostala reakcija in imunokompleksi trajajo dlje časa (včasih celo življenje) in preprečujejo ponovno okužbo ali pojav relapsov. Načelo cepljenja temelji na tvorbi protiteles G, ko človek razvije dolgotrajno imunost z vnosom oslabljenih mikrobov in virusov. Zvišan G - pokazatelj, da je patogen ponovno vstopil v telo ali poslabšal kronično okužbo.

Enzimski imunosorbentni test za E in D ni vključen v program obveznega pregleda. Predpisan je v naslednjih primerih:

• E - kadar se domneva, da patologijo povzročajo zajedavci;
• D - če obstaja možnost, da je patologija sistemska ali se je pojavila zaradi imunske pomanjkljivosti.

Krvni test ELISA omogoča odkrivanje specifičnih protiteles proti tujim povzročiteljem že v zgodnjih fazah patologije. Testiranje temelji na standardni reakciji antigen-protitelo, ki omogoča zaznavanje prisotnosti protiteles na patogen..

Indikacije za laboratorijsko diagnozo

Krvni test za encimski imuno test je indiciran za sum na pojav naslednjih patologij:

• onkologija;
• virusni hepatitis (z vsemi vrstami virusa);
• herpetične lezije sluznice ali kože;
• nekateri nalezljivi procesi (salmoneloza, ošpice, encefalitis, dizenterija);
  sifilis;
• spolno prenosljive okužbe (gonoreja, klamidija, mikoplazmoza itd.);
• atopični procesi (alergije);
• citomegalovirus;
• endokrine motnje;
• imunska pomanjkljivost;
• neplodnost;
• helminthic infestations.

Krvni test ELISA vam omogoča napovedovanje poteka nekaterih nenalezljivih bolezni:

• srčni infarkt;
• kap;
• nevrološke motnje;
• ledvične patologije.

Kot profilaktični ukrep se med fizikalnimi pregledi izvaja ELISA..

Diagnoza ELISA vam omogoča, da prepoznate več kot 600 protiteles proti nalezljivim in neinfekcijskim antigenom, zaradi česar je študija nepogrešljiva pri prepoznavanju bolezni v zgodnji fazi. ELISA velja za najbolj informativen, ko ga testiramo na HIV in onkologijo.

Kaj je osnova tehnike

Zdi se, da obstaja le pet imunoglobulinov in z njihovo pomočjo se določi veliko število patoloških procesov. ali je možno?

Mogoče. To je zato, ker se izračun imunoglobulinskih spojin izvede v skladu z različnimi testi:

• antinuklearna telesa (označujejo avtoimunske procese);
• revmatoidni faktor (razkriva revmatične lezije);
• dvoverižna DNA (odkrije se skupina beljakovin, ki se pojavijo pri sistemskih boleznih);
• Zaslon ENA (definira več vrst antigenov, značilnih za revmatične faktorje ali sistemske lezije vezivnega tkiva);
• anticardiolipin protitelesa (imunokompleksi nastajajo pri HIV, epilepsiji in nekaterih sistemskih procesih);
• ANGA zaslon (spojine, značilne za avtoimunske procese);
• citrulin peptid (protitelesa se pojavijo z revmatoidnim artritisom);
• C-reaktivni protein (C-reaktivni protein kaže na prisotnost akutnega ali poslabšanja kroničnega procesa);
• imunofluorescenčna analiza (kaže na hormonsko odpoved ali prisotnost malignih novotvorb).

Interpretacija analize se izvede ob upoštevanju uporabljenih tehnik. Ocenjevanje pridobljenih podatkov je precej zapleteno in ga opravi zdravnik, za paciente, ki želijo neodvisno analizirati podatke, ki so jih prejeli iz laboratorija pred obiskom zdravnika, pa lahko predlaga naslednjo tabelo:

Tabela prikazuje le splošne podatke. Pri analizi ELISA se pri dešifriranju zdravnika upošteva ne le prisotnost encimov imunoloških spojin, ampak tudi njihova količina ter metode, ki se uporabljajo za izvedbo študije..

Prednosti metode

ELISA analizator se pogosto uporablja pri diferencialni diagnozi bolezni in za spremljanje kakovosti zdravljenja. Tehnika ima več prednosti:

• Poceni. Diagnostični kompleti so relativno poceni.
• Enostavnost Ni potrebe, da se opremi s prefinjeno opremo, študijo pa je mogoče izvesti v katerem koli laboratoriju.
• Visoka vsebina informacij. Zanesljivost določanja vrste antigena je približno 90%.
• Hitrost. IFA analizator je avtomatiziran, v nujnih laboratorijih je mogoče pridobiti raziskovalne podatke v nekaj urah po dostavi biomateriala.
• Zgodnja diagnoza. Imunoglobulini se pojavijo v krvi v začetni fazi bolezni.
• Trajanje skladiščenja. Material, odvzet od pacienta, je lahko shranjen do enega leta.
• Stadij bolezni. Razmerje in osnovne značilnosti imunoglobulinov, ki jih najdemo v plazmi, omogočajo določitev resnosti poteka in stopnje bolezni.
• Dinamični nadzor. Med zdravljenjem z ELISA imunosorbentov test, povezan z encimi, omogoča korekcijo tekoče terapije, odvisno od laboratorijskih parametrov.
• Enostavnost zbiranja biomaterialov Majhna količina venske krvi zadostuje za diagnozo.

Krvni test ELISA je zelo informativen in vam omogoča, da prepoznate patologijo na začetni stopnji razvoja, vendar le na podlagi laboratorijske študije diagnoza ni postavljena. Končna diagnoza je mogoča šele po popolnem pregledu bolnika.

Slabosti tehnike

Kljub številnim prednostim ima krvni test z imunofermentacijo nekaj pomanjkljivosti:

• nezmožnost določitve vrste patogena s 100% natančnostjo (pri nekaterih boleznih nastajajo podobni imunoglobulini);
• verjetnost pridobitve lažno pozitivnega rezultata (zgodi se pri nosečnicah ali če se ne upoštevajo pravila za pripravo na analizo).

Na natančnost diagnoze lahko vpliva naslednje:

• kajenje in pitje;
• živčni napor ali stres;
• psihične vaje;
• jemanje določenih zdravil (kri lahko darujete le 10 dni po odvajanju drog).

Te pomanjkljivosti krvnega testa za ELISA ne preprečujejo zdravnikom, da bi v zgodnjih fazah prepoznali tehniko kot najbolj priročno in informativno za odkrivanje bolezni. Če je potrebno, za razjasnitev podatkov, pridobljenih iz laboratorija, se bolnikom lahko dodelijo bolj specifični testi, ki omogočajo natančnejšo določitev vrste patogena.

ELISA v parazitologiji

IgE je značilen za helminthic invazije, vendar se lahko pojavi v plazmi in z nekaterimi alergijami (v krvi je v majhni količini). Kljub verjetnosti prejema lažno pozitivnih reakcij pa parazitologi pogosto predpišejo kri za ELISA, da odkrijejo naslednje vrste zajedavcev:

• helminti;
• toksoplazma;
• ameba;
• trihinela;
• Giardia
• protozoje;
• ploskev.

Helminthic invazije, kot nalezljivi patogeni, povzročajo proizvodnjo protiteles E. Rast v krvi tega markerja skoraj vedno kaže na prisotnost parazitov v telesu (med atopičnimi reakcijami ostane na isti ravni ali se rahlo poveča).

Paraziti se ne nahajajo nujno na črevesni sluznici, lahko prodrejo v tkiva ledvic, srca in drugih organov. Če se parazitizacija v črevesju zlahka odkrije s prisotnostjo jajčec, ličink ali odraslih posameznikov v preučenem iztrebku, potem se poškodba drugih tkiv določi le z encimsko imunoanalizo.

Zdaj so mnogi razumeli, kaj je ELISA in se ne bojijo več skrivnostnega laboratorijskega krčenja. Dejansko je študija imenovana ne le za potrditev bolezni. Nekateri preskusi imunogorbentov, povezani z encimi (sifilis, HIV), so del programa obveznega zdravniškega pregleda in prejemanje negativnega rezultata je pokazatelj zdravja. In če se testiranje izkaže za pozitivno, potem to ni razlog za paniko: prej se začne zdravljenje odkrite bolezni, ugodnejša je napoved.

ČE Laboratorij

Encimski imunosorbentni test (ELISA) je ena od vrst imunokemičnih analiz. Temelji na zelo specifični imunološki reakciji antigena (AH) z ustreznim protitelesom (AT), da tvori imunski kompleks. V tem primeru je ena od komponent konjugirana na encim. Kot rezultat reakcije encima s kromogenim substratom nastane obarvan izdelek, katerega količino lahko določimo spektrofotometrično.

Vsaka različica ELISA vsebuje 3 obvezne stopnje:

1. Korak prepoznavanja preskusne spojine s specifičnim protitelesom;
2. Stadij tvorbe konjugacijske vezi z imunskim kompleksom ali s prostimi mesti vezave;
3. Stopnja pretvorbe encimske etikete v posneti signal.

Reakcija vključuje:

• Trdna faza;
• AG in AT;
• Konjugat (antigen ali protitelo, označeno z encimom);
• Encimski marker;
• Podlaga;
• Ustavite reagent (najpogosteje se uporablja žveplova kislina).

Trdna faza

Kot trdna faza za izvajanje ELISA lahko uporabimo različne materiale: polistiren, polivinilklorid, polipropilen in druge. Trdna faza so lahko stene epruvete, 96-jamice in druge tablete, kroglice, kroglice, pa tudi nitroceluloza in druge membrane, ki aktivno sorbirajo beljakovine.

Antigeni in protitelesa

AG in AT, ki se uporabljata v ELISA, morata biti visoko prečiščeni in zelo aktivni. AH mora imeti visoko antigenost, optimalno gostoto in število antigenih dejavnikov.
Občutljivost ELISA je odvisna od koncentracije, aktivnosti in specifičnosti uporabljenih protiteles. Uporabljena protitelesa so lahko poli- ali monoklonska, različnega razreda (IgG ali IgM) in podrazreda (IgG1, IgG2).
Občutljivost in specifičnost metode se poveča z uporabo monoklonskih protiteles. V tem primeru je mogoče v vzorcih zaznati nizke koncentracije AG (AT).

Encimski markerji: najpogosteje se uporabljajo hrenova peroksidaza (HRP), alkalna fosfataza (ALP) in β-D-galaktozidaza.

Podlage

Izbira substrata v prvi vrsti določa encim, ki se uporablja kot oznaka, saj je reakcija encim-substrat zelo specifična.

• Za HRP se kot substrat uporablja 3,3 ', 5,5'-tetrametilbenzidin (TMB kromogen). Pojavi se barvna reakcija, katere intenzivnost je odvisna od količine vezanega analita;
• Pri alkalni fosfatazi je substrat 4-nitrofenil fosfat;
• β-D-galaktozidaza katalizira hidrolizo laktoze, da nastane glukoza in galaktoza.

Klasifikacija ELISA

Razvrstitev metod ELISA temelji na več pristopih:

1 - vrsta reagentov, prisotnih v prvi fazi ELISA:

• V konkurenčni ELISA je na prvi stopnji sistema hkrati analit in njegov analog, označen z encimom in tekmuje za specifična vezna mesta zanj;
• Za nekonkurenčne metode je značilna prisotnost samo analizirane spojine in njenih vezavnih mest na prvi stopnji.

2 - po načelu določanja analita:

• Neposredno določanje koncentracije snovi (AH ali AT). Uporabljajo se protitelesa za preskusno snov, povezana z določeno etiketo. V tem primeru bo etiketa v tako dobljenem specifičnem kompleksu AG-AT. Koncentracija analita bo neposredno sorazmerna s posnetim signalom;

• Posredno določanje koncentracije snovi temelji na razliki med celotnim številom vezavnih mest in preostalimi prostimi veznimi mesti. Koncentracija analita se bo v tem primeru povečala, posneti signal pa se bo zmanjšal, zato v tem primeru sledimo inverzni odvisnosti od obsega zaznanega signala.

3 - glede na vrsto rezultatov:

Konkurenčna IFA

1. Na trdni fazi se imobilizirajo specifična monoklonska protitelesa;
2. Antigen, označen z encimom, in testni vzorec se vneseta v vdolbinice plošč v znani koncentraciji. Hkrati so pozitivne in negativne kontrole postavljene v sosednje vrtine. Za izdelavo umerjanja s standardnim neoznačenim antigenom v različnih razredčilih. Izvajajte inkubacijo in pranje;
3. Dodajte substrat, inkubirajte, zaustavite reakcijo, ko se v vrtinah s pozitivno kontrolo razvije optimalno obarvanje;
4. Rezultate beležijo na bralniku IFA. Koncentracija analita je obratno sorazmerna z optično gostoto.

Konkurenčna ELISA za določanje protiteles: želena protitelesa in protitelesa, označena z encimi, tekmujejo med seboj za antigene, adsorbirane na trdni fazi.

Nekonkurenčni „sendvič“ - možnost ELISA

Glavna prednost metode je njena visoka občutljivost, ki presega zmogljivosti drugih shem ELISA.

1. Monoklonska protitelesa ali afiniteto prečiščena poliklonska protitelesa se imobilizirajo na trdni fazi;
2. Preskusni vzorec se vnese v jamice na ploščah, vzporedno pa se postavijo pozitivni kontrolni vzorec in negativni kontrolni vzorec v različnih razredčilih. Inkubirati in umivati;
3. Monoklonalna ali poliklonska protitelesa, označena z encimom, se vnesejo v vdolbinice. Po inkubaciji izvajamo pranje, da odstranimo nevezana protitelesa;
4. Naredite substrat, inkubirajte. Reakcija se ustavi, ko se doseže optimalno obarvanje v vdolbinicah s pozitivno kontrolo;
5. Rezultate beležijo na bralniku IFA. Koncentracija analita je neposredno sorazmerna z optično gostoto.

Kvalitativna analiza se pogosto uporablja pri presejalnih študijah in diagnozi nalezljivih bolezni. Rezultat študije se določi s primerjanjem njene optične gostote z izračunano vrednostjo kritične optične gostote (OPcrit., "Cut-off").

Formula za izračun mejne vrednosti je navedena v navodilih za preskusni sistem. Povprečne vrednosti optične gostote pozitivnih in negativnih kontrol, pa tudi optična gostota posebnega kontrolnega vzorca - kontrola nivoja preseka - lahko sodelujejo pri izračunu meje..
Če je optična gostota vzorca večja od mejne vrednosti, se vzorec šteje za pozitivno za specifična protitelesa.

Za polkvantitativno različico metodologije se izračuna razmerje med povprečno optično gostoto vzorca in mejo optične gostote.

Vzorci veljajo za:

• pozitivno, če je razmerje večje od 1,1;
• dvomljivo, če je razmerje 0,9-1,1;
• negativno, če je razmerje manjše od 0,9.

Dvomljivih rezultatov analize ni mogoče nedvoumno razlagati, za razjasnitev rezultata pa je treba ponoviti pregled v 1-2 tednih.

Metoda ELISA določa:

• Hormoni;
• Tumorski markerji;
• Protitelesa (IgG, IgM) na patogene - okužbe s ToRCH, tuberkulozo, sifilis, virus hepatitisa C (HCV pri), mikoplazmo, klamidijo, giardijo, Helicobacter pylori itd.;
• Virusni antigeni - hepatitis D, E, A (hepatitis B, hepatitis B, virus hepatitisa B), hepatitis C (hepatitis B), hepatitis B (HBs, HBe HBsore);
• Avtoimunske bolezni.